俄国专享会284：实时荧光定量PCR结果分析与常用术语

校正染料(ROX)的使用显著降低样品添加误差或孔间误差，为实验提供稳定的基线，这在定量分析中极大地提升了准确性，并增强了重复测定之间的数据重现性。需要注意的是，不同设备对ROX的需求可能有所不同。

在基线PCR的初始循环阶段，荧光信号几乎没有变化，这为阈值设定提供了可靠的参考。CT值与阈值交点的横坐标可以用来评估结果的有效性。有效性评估的关键要素包括以下几个方面：

结果有效性判断

1. **融解曲线单峰（染料法）**：确保扩增曲线在指数增长区域内呈现明显的单峰特征。

2. **重复孔间CT值标准差（STD）小于0.2**：这表明数据的一致性良好。

3. **合理的阈值设置**：阈值应位于指数增长期内，虽然仪器会自动计算阈值，但并非所有情况下计算结果均合理，必要时应进行手动调整。

4. **NTC确认无气溶胶污染**：NTC（No Template Control）使用水替代模板；若ΔCT=NTC(CT值) - 目的基因(CT值)≥3或≥5，可认为实验中未受到气溶胶污染的影响，结果可靠。

5. **NRT确认无基因组残留**：NRT（No RT Control）是在逆转录反应中，除了逆转录酶，其他组分正常添加；若ΔCT=NRT(CT值) - 目的基因(CT值)≥3或≥5，说明基因组残留不会影响结果的准确性。

6. **扩增效率检测**：待测CT值应处在线性范围内，PCR扩增效率（e）应在90%-120%之间。

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